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陰離子交換色譜柱洗脫液的選擇

更新時(shí)間:2018-05-30      點(diǎn)擊次數(shù):9746
   陰離子交換色譜柱洗脫液的選擇
  
  陰離子交換色譜柱的選擇:
  
  離子交換色譜柱通常粗短,直徑和長度比一般為1:10~1:50。
  
  陰離子交換色譜柱裝柱:
  
  1、色譜柱安裝要垂直。
  
  2、裝柱時(shí)要均勻平整,不能有氣泡。
  
  五、平衡緩沖液的選擇:
  
  平衡緩沖液是指裝柱后和上樣后用于平衡離子交換色譜柱的緩沖液。
  
  平衡緩沖液的離子強(qiáng)度和pH值要保證各個(gè)待分離物質(zhì)的穩(wěn)定,要使各個(gè)待分離物質(zhì)與離子交換劑有適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合,并盡量使待分離物質(zhì)和雜質(zhì)與離子交換劑的結(jié)合有較大的差別。
  
  陰離子交換色譜柱上樣:
  
  上樣方式有正上柱和反上柱。
  
  上樣時(shí)注意樣品液的離子強(qiáng)度和pH值,上樣量應(yīng)小于工作交換量。
  
  陰離子交換色譜柱洗脫:
  
  1、洗脫液的選擇:
  
 ?。?)保證所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都是穩(wěn)定的。
  
 ?。?)要使結(jié)合在離子交換劑上的所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都能夠被洗脫。
  
 ?。?)梯度范圍盡量小一些,以提高分辨率。
  
  2、洗脫方式:
  
  離子交換色譜一般采用梯度洗脫,通常有改變離子強(qiáng)度和改變pH值兩種洗脫方式。
  
  (1)改變離子強(qiáng)度的洗脫:
  
  在洗脫過程中逐步增大離子強(qiáng)度,從而使與離子交換劑結(jié)合的各個(gè)組分被洗脫下來。
  
 ?。?)改變pH值的洗脫:
  
  陽離子交換劑一般是pH值從低到高洗脫,陰離子交換劑一般是pH值從高到低洗脫。
  
  由于pH值可能對蛋白的穩(wěn)定性有較大的影響,一般采用改變離子強(qiáng)度進(jìn)行洗脫。
  
  
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